Дифференциальный диагноз рака желудка

Рак желудка

Рак желудка причины

Этиология и патогенез рака желудка, так же как рака вообще, до сих пор остаются невыяс­ненными, хотя установлен ряд факторов, пред­располагающих к более частому возникновению этого заболевания. Так, замечено, что у мужчин заболеваемость раком желудка на 10-50% вы­ше, чем у женщин.

Это можно объяснить более распростра­ненным среди мужчин, чем среди женщин, куре­нием и более частым приемом крепких алкоголь­ных напитков.

Давно отмечена значительно большая частота рака желудка среди лиц пожилого возраста (старше 50 лет), однако он может возникать у лиц более молодого возраста, а в отдельных слу­чаях — даже у детей.

Рак желудка, возможно, имеет на­следственную предрасположенность к возникно­вению. Описан ряд семей, где все страдали этим заболеванием.

Отмечена зависимость частоты рака желудка от особенностей питания населения. Установле­но, что преобладание в пищевом рационе копче­ностей, специй, хлеба, сыра, риса, очень горячей, особенно жирной пищи, частое употребление крепких алкогольных напитков способствуют бо­лее частому возникновению рака желудка, в то время как среди групп населения, преимущест­венно употребляющих в пищу цитрусовые пло­ды, овощи, молоко, говядину, стерилизованные консервированные продукты, рак желудка встре­чается несколько реже.

Среди лиц, нерегулярно питающихся, рак желудка также встречается не­сколько чаще, чем среди лиц, соблюдающих рациональный режим питания.

Доказана несомненная канцерогенность таких веществ, как метилхолантрен, 3,4-бензпирен, со­держащихся в каменноугольной смоле, и некото­рых других.

Наиболее частым фоном развития рака же­лудка является хронический атрофический гас­трит с секреторной недостаточностью желудка (особенно атрофически-гиперпластический гас­трит). Больные В12-дефицитной анемией, у кото­рых закономерно наблюдаются явления выра­женной атрофии слизистой оболочки желудка, по данным различных авторов, в 3—20 раз чаще умирают от рака желудка, чем лица, не. стра­дающие этим заболеванием. Многочисленные наблюдения свидетельствуют о возможности озлокачествления полипов желудка в 12—50% случаев.

Перерождение хронических язв желудка, особенно длительно существующих, каллезных, в рак по данным различных, авторов наблю­дается в 1,3—20% случаев.

Патологическая анатомия

По характеру роста опухоли (макроскопически) различают следую­щие формы рака желудка: 1) полиповидный или грибовидный рак с зкзофитным ростом в про­свет желудка, напоминающий полип на ножке; опухоль отличается медленным ростом, обычно поздно изъязвляется и метастазирует; 2) блюдцеобразный с изъязвлением в центре («язвенноподобный», поздно дающий метастазы; 3) икфильтративно-язвенный, наиболее частый; 4) диффузноинфильтративный рак. Последние две формы отличаются быстрым ростом и ранним множественным метастазированием.

По гистологическому строению выделяют аденосолидный, коллоидный или слизистый рак, медуллярный (с преобладанием паренхимы в массе опухоли) и фиброзный рак — скирр (с пре­обладанием в опухоли стромы).

Чаще всего рак желудка локализуется в пилороантральном отделе желудка, реже — на малой кри­визне и в кардиальном отделе, еще реже — на передней и задней стенке, большой кривизне и в области дна желудка. Метастазироваеие проис­ходит по лимфатическим и кровеносным сосу­дам: в регионарные лимфатические узлы (ретропилорические, малого сальника, большого саль­ника), в левые надключичные лимфатические узлы (так называемый вирховский метастаз), у женщин — в яичники (крукенберговский мета­стаз), в параректальную клетчатку (шиндлеровский метастаз), в печень, пупок, забрюшинные лимфатические узлы, легкие, редко — в кости и другие органы.

Рак желудка симптомы и периоды

Условно выделяют:

1) ранний (или начальный) период болезни

2) пе­риод явных клинических проявлений болезни

3) терминальный период

В ранней стадии заболевания больные отме­чают следующие симптомы рака желудка: немотивированную слабость, апатию, быструю утомляемость, снижение аппетита, нередко — отвращение к мясной пище, иногда — неприятный вкус во рту, частую отрыжку, неред­ко с тухлым запахом, ощущение тяжести в подложечной области и другие нерезко выра­женные симптомы желудочного дискомфорта, беспричинное похудание — так называемый син­дром малых признаков (А. И. Савицкий), позво­ляющий заподозрить данное заболевание и целе­направленно провести обследование больных.

Рак желудка в период явных клинических проявлений основные симптомы:

1) боли в эпигастральной области сосущего или ноющего характера, постоянные или без определенной свя­зи с временем приема пищи, иногда напоминаю­щие язвенные;

2) анорексия, в редких случаях отмечается чрезмерный аппетит (булимия);

3) прогрессирующее похудание;

4) прогрессирую­щая дисфагия (при раке кардиального отдела желудка, распространяющемся в пищевод), пре­имущественно с задержкой при проглатывании плохо разжеванной и сухой пищи;

5) тошнота и рвота, нередко с примесью крови в рвотных мас­сах (часто при локализации рака в пилороантральном отделе желудка); ощущение быстрой насыщаемости и переполнения желудка — вследствие стенозирования привратника и нару­шения пассажа желудочного содержимого в две­надцатиперстную кишку;

6) хронические желу­дочные кровотечения (с периодическим выделе­нием стула типа мелены или скрытое кровоте­чение), приводящие к анемизации;

7) беспричин­ная длительная лихорадка (вначале обычно суб­фебрилитет). Перечисленные симптомы с пре­обладанием тех или иных из них в зависимости от локализации размеров, морфологического строения опухоли наблюдаются в определенной стадии болезни у большинства больных.

Рак желудка формы. В зави­симости от особенностей клинического течения различают следующие формы рака желудка:

1) диспепсическую (проявляется снижением и из­вращением аппетита, ощущениями быстрой на­сыщаемости во время еды, тяжести и давления в эпигастральной области, тошнотой);

2) болевую (ведущим симптомом являются боли);

3) лихора­дочную (с повышением температуры до 38-40°С без ярко выраженных других симптомов;

4) ане­мическую;

5) геморрагическую (проявляется же­лудочными кровотечениями вследствие раннего изъязвления и распада опуходи).

Однако наиболее неблагоприятными вследст­вие трудности раннего распознавания являются латентная (при которой довольно длительно отсутствуют все симптомы заболевания) и без­болевая (проявляющаяся долгое время только синдромом малых признаков) формы рака желудка.

При локализации опухоли в кардиальном и фундальном отделах желудка боли могут симу­лировать стенокардию. Часто, особенно при кардиоэзофагеальном раке, имеет место усиленная саливация, икота. В части случаев первые клини­ческие проявления опухоли бывают обуслов­лены метастазами (в легкие, печень, кости и т. д.).

При осмотре нередко отмечается бледность (вследствие анемизации) или своеобразный зем­листый цвет кожных покровов. Пальпаторно в части случаев можно отметить болезненность и некоторую ригидность мышц передней брюшной стенки в эпигастральной области, иногда удается пальпировать опухоль в виде округлого плотного образования.

У некоторых больных выявляются отдаленные метастазы: Так, например, может пальпироваться увеличенный (диаметром 1— 1,5 см) лимфатический узел в левой надключич­ной области (вихровский метастаз) или опреде­ляется увеличенная с неровной поверхностью пе­чень. У больных с локализацией опухоли в прив­ратнике можно отметить выпячивание передней брюшной стенки в эпигастральной области и наблюдать медленно идущую слева направо пе­ристальтическую волну сокращения желудка. При перкуссии зона тимпанита над областью же­лудка расширяется и заходит вправо от средней линии.

В терминальный период заболевания больных обычно беспокоят сильные изнуряющие боли в эпигастрии, правом подреберье (метастазы в пе­чень), спине (прорастание опухоли в поджелудоч­ную железу), иногда в костях (в области мета­стазов), налицо полное отсутствие аппетита, от­вращение к пище, тошнота.

Часто почти после каждого приема пищи возникает рвота, имеют место резкая слабость, похудание, порой до сте­пени кахексии, лихорадка. Кожа больных обычно своеобразного землистого оттенка, сухая, в ря­де случаев можно отметить наличие асцита (вследствие метастазов в лимфатические узлы ворот печени и ракового обсеменения брю­шины).

Рентгенологическое исследование во многих случаях уже в ранних стадиях заболевания позво­ляет подтвердить диагноз и установить локали­зацию опухоли. Патогномичным рентгенологи­ческим признаком рака желудка является наличие так называемого дефекта наполнения, представляющего собою участок на контуре или рельефе желудка, не заполняющийся контраст­ной массой.

В зоне локализации опухоли обычно отсутствует перистальтика стенки желудка (вследствие раковой инфильтрации), наблюда­ются «обрыв» и деструкция складок слизистой оболочки. При изъязвлении опухоли определяет­ся нишеподобное выпячивание, выполняющееся контрастной массой и окруженное выбухающим в просвет желудка вследствие раковой инфиль­трации в виде пальцевидного «вала» участком желудочной стенки. При раннем распаде опухоли (первично-язвенная форма рака) рентгенологиче­ская картина очень может напоминать обычную пептическую язву желудка.

В ряде случаев рако­вая инфильтрация стенки желудка приводит к его деформации, иногда к перегибам (каскадный желудок). Рак антрального и пилорического отделов желудка рано приводит к стенозированию последнего, что сопровождается нарушени­ем эвакуации контрастной массы в двенадцати­перстную кишку, расширением вышележащих отделов желудка, содержащих натощак большое количество жидкости (желудочный сок, слюна) и принятой накануне пищи.

Отсутствие смещения желудка (спонтанного и при пальпации эпигастральной области рентге­нологом во время исследования) является одним из признаков прорастания опухоли в близлежа­щие органы. Большое значение в диагностике рака желудка приобретает гастрофиброскопия.

Гастроскопию необходимо проводить всем боль­ным, у которых имеются подозрения на опухоль «желудка, при длительно нерубцующихся пептических язвах желудка, а также при установлен­ном на основании клинических данных и под­твержденном рентгенологически диагнозе опухо­ли — для точного определения ее характе­ра, размеров и проведения биопсии. При гастроскопии внешний вид опухоли во многих случаях достаточно характерен.

Это или полиповидная опухоль, часто на широ­ком основании, обычно с неровной бугристой поверхностью, нередко с участками изъязвлений и некроз на поверхности, либо блюдцеобразное раковое образование с изъязвлением в центре, окруженное высоким бугристым валом, припод­нимающимся над окружающей слизистой обо­лочкой. Цвет опухоли может быть от интен­сивно-красного до серовато-желтого. Дно изъяз­влений и язв может быть гладким, но чаще — неровным, покрыто некротическими наложе­ниями, часто кровоточит. Более йоздней стадией процесса является большая инфильтративная опухоль со значительным распадом в центре в виде крупной, диаметром в несколько сантимет­ров раковой язвы.

Складки слизистой оболочкй вокруг опухоли становятся ригидными вследст­вие значительной раковой инфильтрации и обры­ваются у края изъязвления, не расправляются при раздувании желудка (с помощью специаль­ного устройства гастрофиброскопа). Диффузный инфильтративный рак имеет вид очагового выбу­хания стенки желудка с неровной серовато-бело­го цвета слизистой оболочкой, часто легкокро­воточащей; стенка желудка в этом участке не перистальтирует.

При раздувании желудка воз­духом это выбухание не исчезает, складки слизи­стой оболочки вокруг не расправляются. Во вре­мя гастроскопии производится прицельная биоп­сия. Специальное приспособление некоторых гастрофиброскопов позволяет фотографировать подозрительные в отношении опухолевого роста участки слизистой оболочки желудка и сравни­вать данные при последующей гастроскопии. Во всех подозрительных случаях, когда устано­вить диагноз опухоли желудка сразу не удается, через 10—20 дней проводится повторная гастро­скопия и биопсия.

Широко применяется в диагностических целях цитологическое исследование, материал для ко­торого получают при промывании желудка изо­тоническим раствором, раствором хемотрипсина («эксфолиативный метод») либо используя двухканальный зонд с абразивным баллоном, имею­щим шероховатую поверхность, что облегчает слущивание клеток с поверхности стенки желуд­ка, которые затем вместе с промывными водами желудка отсасываются через второй канал зонда («абразивный метод»). Однако наиболее надеж­ным является прицельное взятие материала для цитологического исследования из подозритель­ных участков с помощью гастрофиброско­па (как и для гистологического исследова­ния).

Считается, что цитологическое исследование позволяет подтвердить диагноз опухоли прибли­зительно в 80% случаев, в том числе и на ранней стадии заболевания.

Методы лабораторной диагностики рака же­лудка малоспецифичны. Однако весьма подозри­тельными в отношении возникновения опухоли являются нарастающее увеличение СОЭ, анемизация (с учетом соответствующих клинических признаков). Анемия может иметь нормохромный характер и вначале быть нерезко выраженной, однако при распаде опухоли вследствие хрониче­ской кровопотери, а в ряде случаев — массивных желудочных кровотечений анемия быстро про­грессирует и становится гипохромной. Нередко наблюдается небольшой лейкоцитоз.

Наличие ахлоргидрии и ахилии часто наблюда­ется при раке тела желудка, но рак пилороантрального отдела желудка может протекать на фоне нормальной и даже повышенной кислотнос­ти желудочного сока. При наличии ахлоргидрии нередко обращают внимание на сравнительно высокую (15—20—25 титрационных единиц) так называемую связанную кислотность желудочно­го сока, что объясняется усилением процессов брожения в желудке с образованием большого количества органических кислот, в частности молочной. Однако этот признак также неспеци­фичен.

Исследование кала на скрытую кровь в подав­ляющем большинстве случаев дает положитель­ные результаты.

Лапароскопия используется уже в поздней ди­агностике рака желудка, в основном для опре­деления операбельности случая.

Рак желудка течение и осложнения

Течение заболевания прогрессирующее, средняя продолжительность жизни без лечения в большинстве случаев сос­тавляет 9—14 мес после установления диагноза. Осложнения связаны с ростом и распадом опу­холи, а также ее метастазированием.

Метастазы рака желудка нередко сказываются на общей клинической картине заболевания, воз­никают местные симтомы, обусловленные сами­ми метастазами и их ростом, так что в запущен­ных случаях при множественном метастазировании нередко трудно подтвердить, что первичным источником опухоли является именно желудок. Иногда сравнительно большая по размерам опу­холь желудка протекает скрыто, а метастаз или метастазы в другие органы определяют всю кли­ническую картину заболевания.

С целью более четкого определения лечебной тактики и прогноза различают 4 стадии рака желудка:

1 стадия: опухоль не более 2 см в диаметре, не прорастающая за пределы слизистой и подслизи­стой оболочек желудка и не метастазирующая;

2 стадия: опухоль достигает в диаметре 4— 5 см, прорастает подслизистый и даже мышеч­ный слой стенки желудка, имеются одиночные, подвижные метастазы в ближайшие регионар­ные лимфатические узлы (лимфатические узлы 1—2 коллекторов);

3 стадия: опухоль инфильтрирует подсерозный и серозный слои стенки желудка; часто про­растает в соседние органы; имеются множест­венные метастазы в регионарные лимфатические узлы, нередко наблюдаются различные осложне­ния;

4 стадия: раковая опухоль любых размеров и любого характера при наличии отдаленных мета­стазов.

В соответствии с более детализированной меж­дународной классификацией все многообразие ва­риантов развития опухолевого процесса опреде­ляется символами Т (tumor), N (nodules) и М (metastases). Классификация учитывает степень прорастания опухолью стенки желудка (Ti_4), отсутствие или наличие регионарных (NX_,NX+) и. отдаленных (М0 , Mi ) метастазов.

Рак желудка дифференциальный диагноз

В ряде случаев грубые, резко утолщенные складки желудка (при некоторых формах хронического гастрита, так называемый гастрит Менетрие и др.), выявлен­ные при рентгенологическом или эндоскопиче­ском исследованиях, заставляют думать о воз­можности раковой инфильтрации стенки желуд­ка («подслизистый рост»). Применение специ­альных рентгенологических методов (двойное контрастирование, париетография, ангиография) и эндоскопии (дозированное заполнение желудка воздухом, ведущее к расправлению складок сли­зистой оболочки), трансиллюминации с учетом клинических данных, картины крови облегчает установление правильного диагноза.

Пептические язвы желудка, особенно длитель­но существующие, «каллезные» всегда представ­ляют трудности для дифференциации с быстрораспадающейся раковой опухолью (так называемые первично-язвенные формы рака желудка), кроме того, приблизительно в 10% случаев с те­чением времени они малигнизируются.

Часто язвенные формы рака желудка протекают с кли­нической картиной язвенной болезни, при этом, о чем следует всегда помнить, при назначении ща­дящей диеты и интенсивной противоязвенной герапии раковые язвы могут временно умень­шаться в размерах (вследствие уменьшения дис­трофических процессов и распада опухоли) и даже исчезать (рубцеваться). Решающее значение в дифференциальной диагностике раковых и пептических язв желудка имеют гистологическое и цитологическое исследования прицельно (через фиброскоп) взятых биоптатов из краев язвенного дефекта.

Достоверное установление стойкой ахлоргид­рии и ахилии при наличии язвенноподобного де­фекта слизистой оболочки желудка в высшей сте­пени подозрительно на рак.

Сифилитические и туберкулезные язвы желудка встречаются очень редко, последние — обыч­но уже на фоне генерализованного туберкулеза, что облегчает дифференциальную диагностику их с раковыми язвами.

Дифференциальный диагноз саркомы и рака желудка основывается на данных биопсии опухо­ли и не имеет принципиального значения для лечебной тактики и прогноза.

Доброкачественные опухоли желудка встреча­ются значительно реже, чем рак, при рентгено­логическом исследовании они отличаются, как правило, ровностью контуров «дефекта наполне­ния», отсутствием ригидности стенки желудка в прилегающих участках. Часто дифференциаль­ный диагноз возможен при гастрофиброскопии.

В редких случаях совокупность диспепсических явлений и рентгенологически определяемого дефекта наполнения является проявлением длительно находящегося в желудке инородного тела (безоара).

Рак желудка лечение

Единственным радикальным мето­дом лечения рака желудка является хирургиче­ский метод. Показанием к хирургическому лече­нию являются все случаи рака желудка в I—II стадии. В последнее время достижения хирургии позволяют успешно выполнить радикальную операцию с хорошими отдаленными результата­ми у ряда больных с III стадией рака желудка.

Операция сводится к резекции части желудка (дистальная или проксимальная субтотальная резекция) или тотальной гастрэктомии, удале­нию регионарных лимфатических узлов, а при прорастании опухоли на ограниченном участке в соседние органы — также к резекции поражен­ной части этих органов (поджелудочная железа, печень, поперечная ободочная кишка) или всего органа (селезенка). Обязательным условием яв­ляется резекция в пределах здоровой ткани на 6—7 см отступая от видимого края опухоли.

Консервативная терапия рака желудка не дает излечения от этого заболевания, но позволяет облегчить страдания больных и в известной сте­пени несколько продлить их жизнь. Консерва­тивное лечение показано неоперабельным боль­ным. Оно проводится в 3 направлениях: 1) хи­миотерапия, 2) лучевая терапия, 3) симптомати­ческая терапия.

В настоящее время для химиотерапии рака же­лудка применяют фторурацил, фторафур, кото­рые избирательно тормозят размножение опухо­левых клеток, однако (правда, в меньшей сте­пени) влияют на пролиферирующие клетки нор­мальной ткани (особенно кроветворную ткань, слизистую оболочку пищеварительного тракта).

Фторурацил относится к группе антиметаболи­тов, представляет собой 2,4-диоксо-5-фторпиримидин, в раковых клетках он превращается в 5фтор-2-дезоксиуридин-5-монофосфат, являющий­ся конкурентным ингибитором фермента тимидинсинтетазы, участвующей в синтезе ДНК. Вводят внутривенно медленно (или капельно в 500 мл 5% раствора глюкозы) из расчета 10— 15 мг/кг (0,5—1,0 г в сутки) ежедневно или через день.

Иногда вводят 4 дня подряд по 15 мг на 1 кг массы тела больного, а затем продолжают лечение в половинной дозе через день. Препарат вводят до развития умеренных токсических явле­ний, которыми чаще всего бывают угнетение кроветворения, анорексия, рвота, диарея, дерма­титы и др.

Обычно курсовая доза 3—5 г препа­рата, в редких случаях хорошей переносимос­ти — до 7 г, затем лечение прерывают, повтор­ные курсы при эффективности препарата прово­дят с интервалом 4—6 нед. Лечение фторурацилом противопоказано в терминальных стадиях заболевания, при кахексии, тяжелых паренхима­тозных поражениях печени и почек, лейкопении и тромбоцитопении. С целью уменьшения побоч­ных явлений больным во время лечения назна­чают большие дозы витаминов (особенно В6 и С), проводят гемотрансфузии.

Лучевая терапия рака желудка пока малоэф­фективна, лишь около 10% опухолей под ее влия­нием временно уменьшается в размерах, в основ­ном это опухоли кардиального отдела желудка.

Симптоматическая терапия рака желудка про­водится в неоперабельных случаях. Основная ее цель — купирование болей, поддержание гемои гомеостаза. Очень строгого соблюдения диеты обычно не требуется, пища должна быть полно­ценной, разнообразной, легкоусвояемой, богатой белками и витаминами.

Создание в нашей стране системы специализи­рованной онкологической помощи и широкой сети специализированных лечебных учреждений (стационары, диспансеры) позволяет совершен­ствовать раннюю диагностику и добиваться лучших результатов лечения этого грозного за­болевания.

Рак желудка прогноз

Прогноз больного раком желудка определяется стадией процесса, возможностью выполнения радикальной операции, гистологиче­ским строением опухоли. При экзофитно расту­щих опухолях прогноз лучше, чем при эндофитно растущих, наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах значительно ухудшает прогноз.

Эффективность оперативного лечения рака же­лудка в первую очередь характеризуется отда­ленными результатами — числом радикально оперированных больных, проживших более 5 лет после операции. В этом случае опасность реци­дивов и выявление метастазов значительно уменьшается.

Профилактика рака желудка заключается в широкой пропаганде рационального регулярного питания, борьбе с курением, алкоголизмом, уст­ранении производственных вредностей. Большое значение имеют организация диспансерного наб­людения за больными так называемыми предра­ковыми заболеваниями, своевременное их лече­ние.

Последнее время создаются предпосылки для организации широкого диспансерного обсле­дования населения с целью раннего выявления рака желудка.

Другие злокачественные опухоли желудка. Другие злокачественные опухоли желудка встре­чаются значительно реже, чем рак желудка. Это различ­ные виды сарком желудка: лимфосаркома, веретеноклеточная саркома (фибро-, невроили лейомиосаркома; реже — круглоклеточные или полиморфноклеточные саркомы и другие ее раз­новидности). Саркома возникает чаще в более молодом возрасте, чем рак (до 30—40 лет), пре­имущественно у мужчин. Очень редко выявля­ется злокачественный карциноид желудка.

Клиническая картина сарком желудка поли­морфна, в некоторых случаях заболевание срав­нительно долго протекает бессимптомно и обна­руживается случайно при пальпации или рентге­нологическом исследовании желудка, в других случаях клиническая и рентгенологическая карти­на неотличима от рака желудка и необходима гастрофиброскопия и прицельная биопсия опухо­ли, чтобы установить правильный диагноз.

Те­чение сарком желудка прогрессирующее, посте­пенно нарастает истощение больного, возникают желудочно-кишечное кровотечение, ближайшие и отдаленные метастазы (в половине случаев); средняя продолжительность жизни больного с саркомами желудка без хирургического лечения колеблется в интервале 11—25 мес.

Карциноидная опухоль желудка выявляется при случайном профилактическом обследовании либо при целенаправленном исследовании пище­варительного тракта, предпринятом в связи с на­личием у больного характерных признаков карциноидного синдрома.

Лечение сарком и злокачественного карциноида желудка оперативное.

Цели лечения:
· полное или частичное удаление органа со злокачественным новообразованием;
достижение полной или частичной регрессии, стабилизации опухолевого процесса
Тактика лечения**:
Выбор методов лечения рака желудка зависит от многих факторов, в том числе размеров самой опухоли, вовлечения в процесс других органов, тканей, лимфатических узлов. Важным моментом является наличие у пациента сопутствующих заболеваний (тяжелые болезни сердца, легких, почек). Специалисты учитывают все эти факторы. Для пациента разрабатывают индивидуальный план, который может состоять из хирургического лечения и/или химиотерапии.
Лечение в зависимости от стадии;
Стадии 0, I А, I В, IIА, IIВ:
· Дистальная субтотальная гастрэктомия.
· Проксимальная субтотальная гастрэктомия.
· Лапароскопическая гастрэктомия (при условии овладения техникой вмешательства и наличию соответствующего оборудования)
· Гастрэктомия (тотальная).
· Эндоскопическая мукозэктомия (Tis или T1а) при условии овладения техники проведения операций).
· Обязательным компонентом стандартных операций является лимфодиссекция в объеме D2. Стадии заболевания Т3, N1-2 предполагают курсы адъювантной полихимиотерапии.
Стадии IIIА, IIIВ, IIIС
· Гастрэктомия.
· Обязательным компонентом стандартных операций является лимфодиссекция в объеме D2. Установление до операции местнораспространенной формы (Т3-Т4), наличие метастазов в регионарных (N1-N2), а также низкодифференцированные гистологические формы опухолевого процесса предполагает проведение курсов (2-3) неоадъювантной лекарственной терапии при условии согласия пациентов на проведение лекарственной терапии в предоперационном режиме, а также отсутствием противопоказаний к ней (опухолевые стенозы, кровотечения и др.).
· Адъювантные курсы полихимиотерапии с учетом ответа опухоли на проводимую предоперационную лекарственную терапию.
Стадия IV
· Оперативное лечение с паллиативной целью, например при опухолевой обструкции, перфорации или сильного кровотечения. Может быть выполнена циторедуктивная гастрэктомия, гастро-энтероанастомоз. Лимфодиссекция не выполняется. Могут рассматриваться варианты гастростомии и/или еюностомии, а также стентирование при желудочной обструкции.
· Адъювантные курсы полихимиотерапии;
· Самостоятельные курсы паллиативной полихимиотерапии.
Рецидив
Хирургические вмешательства (индивидуализированно):
· различные по объему радикальные и паллиативные оперативные вмешательства;
· эндоскопическое разрушение опухоли;
· установка стентов.
Паллиативная химиотерапия (индивидуализированно).
Критерии эффективности лечения
Эффект от проведенного лечения оценивается по критериям ВОЗ:
Полный эффект – исчезновение всех очагов поражения на срок не менее 4х недель.
Частичный эффект – большее или равное 50% уменьшение всех или отдельных опухолей при отсутствии прогрессирования других очагов.
Стабилизация – (без изменений) уменьшение менее чем на 50% или увеличение менее чем на 25% при отсутствии новых очагов поражения.
Прогрессирование – увеличение размеров одной или более опухолей более 25% либо появление новых очагов поражения.
Немедикаментозное лечение:
Двигательные режимы, используемые в больницах и госпиталях, делятся на: I — строгий постельный, II — постельный, III — палатный (полупостельный) и IV — свободный (общий).
При проведении неоадъювантной или адъювантной химиотерапии — режим III (палатный). В раннем послеоперационном периоде — режим I (строгий постельный), с дальнейшим его расширением до II, III по мере улучшения состояния и заживления швов.
Диета. Для больных в послеоперационном периоде – голод, с переходом на стол №1, 1а. Для пациентов получающих химиотерапию стол — №1, 1а.
Соблюдение диеты в послеоперационном периоде, для больных раком желудка -пожизненное.
Медикаментозное лечение:
Химиотерапия – это медикаментозное лечение злокачественных раковых опухолей, направленное на уничтожение или замедление роста раковых клеток с помощью специальных препаратов, цитостатиков. Лечение рака химиотерапией происходит систематически по определенной схеме, которая подбирается индивидуально. Как правило, схемы химиотерапии опухолей состоят из нескольких курсов приема определенных комбинаций препаратов с паузами между приемами, для восстановления поврежденных тканей организма.

Существует несколько видов химиотерапии, которые отличаются по цели назначения:
· неоадъювантная химиотерапия опухолей назначается до операции, с целью уменьшения неоперабельной опухоли для проведения операции, а так же для выявления чувствительности раковых клеток к препаратам для дальнейшего назначения после операции.
· адъювантная химиотерапия назначается после хирургического лечения для предотвращения метастазирования и снижения риска рецидивов.
· лечебная химиотерапия назначается для уменьшения метастатических раковых опухолей.
В зависимости от локализации и вида опухоли химиотерапия назначается по разным схемам и имеет свои особенности.
Показания к химиотерапии:
· гистологически верифицированные ЗНО желудка;
· при лечении нерезектабельных опухолей;
· отдаленные метастазы или отдаленных лимфатических узлах;
· рецидив опухоли;
· удовлетворительная картина крови у пациента: нормальные показатели гемоглобина и гемокрита;
· сохраненная функция печени, почек, дыхательной системы и ССС;
· возможность перевода неоперабельного опухолевого процесса в операбельный;
· отказ пациента от операции;
· улучшение отдаленных результатов лечения при неблагоприятных гистотипах опухоли (низкодифференцированный, недифференцированный).
Противопоказания к химиотерапии:
Противопоказания к химиотерапии можно разделить на две группы: абсолютные и относительные.
Абсолютные противопоказания:
· гипертермия >38 градусов;
· заболевание в стадии декомпенсации (сердечно – сосудистой системы, дыхательной системы печени, почек);
· наличие острых инфекционных заболеваний;
· психические заболевания;
· неэффективность данного вида лечения, подтвержденная одним или несколькими специалистами;
· распад опухоли (угроза кровотечения);
· тяжелое состояние больного по шкале Карновского (таблица см. приложение 1) 50% и меньше.
Относительные противопоказания:
· беременность;
· интоксикация организма;
· активный туберкулез легких;
· стойкие патологические изменения состава крови (анемия, лейкопения, тромбоцитопения);
· кахексия.
Ниже приведены основные схемы химиотерапии, используемые в качестве 1-й и 2-й линии.
Комбинированная химиотерапия:
1. DCF:
Доцетаксел 75мг/м2, в/в, 1-й день;
Цисплатин 75мг/м2, в/в, более 1-3ч 1-й день;
Фторурацил 750мг/м /дн, в/в, длительная инфузия, с 1-го по 5-й дни.(УД-А)
Каждый 21 день.
2. CF:
Цисплатин 100мг/м , в/в, более 1-3ч, 1-й день;
Фторурацил 1000мг/м /дн, длительная инфузия, с 1-го по 5-й дни.
Каждые 28 дней.
3. ECF:
Эпирубцин 50мг/м , в/в, 1-й день;
Цисплатин 60мг/м2, в/в, 1-й день;
Фторурацил 200мг/м2/дн, в/в, длительная инфузия, в течение 24 часов
Каждый 21 день.
4. EOF:
Эпирубицин 50мг/м , в/в, 1-й день Оксалиплатин 130мг/м2, в/в, 1-й день; фторурацил 200мг/м2/дн в/в длительная инфузия 24 часов Каждый 21 день.
5. ЕСХ:
Эпирубицин 50мг/м , в/в, 1-й день; Цисплатин 60мг/м2, в/в, 1 -й день;
Капецитабин 625мг/м , перорально, 2р/день, длительно. Каждый 21 день.
6. ЕОХ:
Эпирубицин 50мг/м , в/в, 1-й день; Оксалиплатин 130мг/м2, в/в, 1-й день; Капецитабин 625мг/м , перорально, 2р/день, длительно. Каждый 21 день.
7. ELF:
2 2 Этопозид 120мг/м , в/в, с 1-го по 3-й день (100 мг/ м для больных старше 60 лет);
Кальция фолинат (или натрия фолинат) 300мг/м , в/в, с 1-го по 3-й день;
фторурацил 500мг/м2, в/в, с 1-го по 3-й день.
Каждый 21-28 дней.
8. IP:
Иринотекан 70мг/м2, в/в, 1-й и 15-й дни; Цисплатин 80мг/м2, в/в, 1-й день. Каждые 28 дней.
9. FAP:
фторурацил 300мг/м , в/в, с 1-го по 5-й дни; Доксорубицин 40мг/м2, в/в, 1 -й день; Цисплатин 60мг/м2, в/в, 1 -й день Каждые 5 нед.
10. DP
Доцетаксел + Цисплатин:
Доцетаксел 85мг/м , в/в, 1-й день;
Цисплатин 75мг/м2, в/в, 1-й день.
Каждый 21 день.
11. FOLFOX
Оксалиплатин 100мг/м2 в/в 1-й день+кальция фолинат 200мг/м2 2-час. инфузия 1-2 день +5Fu 400мг/м2 болюсно 1-2 день +5Fu 600мг/м2 22-час.инфузия в 1-2 день, каждые 2 недели;
12. XP: цисплатин 80мг/м2 в 1-й день +капецитабин 1000мг/м2 2 раза в день с 1-ого по 14-й дни , каждые 3 недели;
13. CapOX(XELOX): оксалиплатин 130мг/м2 в/в в 1-й день + кабецитабин по 1000мг/м2 2 раза в день с 1 по14-й день, каждые 3 недели;
При метастатическом и рецидивирующем раке желудка при подтверждении
гиперэкспрессии HER2 (ИГХ 3+ или ИГХ2+/ FISH+) (УД-В) :
Капецитабин 1000мг/м , дважды в день, с 1-го по 14-й дни;
Цисплатин 80мг/м , 1-й день.
Цикл 3-х недельный, 6 курсов.
Трастузумаб: 8мг/кг — нагрузочная доза, 6мг/кг — поддерживающая доза, 3-х недельный режим введения до прогрессирования или фторурацил 800мг/м /дн, длительная внутривенная инфузия, с 1-го по 5-й дни; Цисплатин 80мг/м2, 1-й день. Цикл 3-х недельный, 6 курсов.
Трастузумаб: 8мг/кг — нагрузочная доза, 6мг/кг — поддерживающая доза, 3-х недельный режим введения до прогрессирования. (УД-В)
Адъювантная химиолучевая терапия
1 курс химиотерапии:
фторурацил 425мг/м, в/в, с 1-го по 5-й дни;
Кальция фолинат (или натрия фолинат) 20мг/м2, в/в, с 1-го по 5-й дни. Химиолучевая терапия на 28-й день от начала химиотерапии
Лучевая терапия: 1,8Гр/дн до СОД 45Гр
фторурацил: 400мг/м , в/в, с 1-го по 4-й дни и с 23-го по 25-й дни лучевой терапии;
Кальция фолинат (или натрия фолинат) 20мг/м2 в/в с 1-го по 4-й дни и с 23-го по 25-й дни лучевой терапии.
После химиолучевой терапии продолжение химиотерапии 2 курса: фторурацил 425мг/м , в/в, с 1-го по 5-й дни;
Кальция фолинат (или натрия фолинат) 20мг/м2, в/в, с 1-го по 5-й дни.
Монохимиотерапия
1. фторурацил 500мг/м2, в/в, с 1-го по 5-й дни. Каждые 28 дней.
2. доцетаксел 100мг/м2, в/в, 1-й день. Каждый 21 день или
доцетаксел 36мг/м , в/в, еженедельно, в течение 6 нед. Каждые 8 нед.
Функционирующие НЭО G1-G3: аналоги соматостатина (симптоматическая терапия).
Октреотид 0,1 мг п/к 3 раза в сутки в течение короткого периода времени (примерно 2 недели) с целью оценки его эффективности и общей переносимости,
затем Октреотид 20 мг внутримышечно 1раз/28 дней
Если в течение 3 месяцев обеспечивается адекватный контроль клинических проявлений и биологических маркеров заболевания – октреотид 10 мг внутримышечно 1раз/28 дней.
Если в течение 3 месяцев обеспечивается только частичный контроль клинических проявлений и биологических маркеров заболевания – октреотид 30 мг внутримышечно каждые 4 недели.

Распространенные нейроэндокринные опухоли толстой кишки или с неизвестной локализацией первичной опухоли – октреотид 30 мг внутримышечно 1раз/28 дней до прогрессирования.
Нефункционирующие НЭО
Ki67<2-10%, G1/G2:
1) аналоги соматостатина,
2) α-интерферон,
3) эверолимус 10мг внутрь ежедневно до прогрессирования,
4) эверолимус 10мг внутрь ежедневно в комбинации с октреотид 1раз/28 дней, до прогрессирования
Ki67 3-20%, G1/G2:
1) фторурацил+эверолимус,
2) темозоломид+капецитабин,
3) аналоги соматостатина
Ki67>20%, G3:
1) карбоплатин/цисплаин+этопозид,
2) темозоломид+бевацизумаб,
3) темозоломид+капецитабин+бевацизумаб,
4) аналоги соматостатина
Схемы химиотерапии, химиотаргетной, иммунотерапии:
1) Цисплатин — 80 мг/м² в/в капельно в 1-й день.
Этопозид — 120мг/м² в/в капельно в 1-3-й день.
Повторение цикла каждые 4 недели;
2) Карбоплатин – AUC 4-5.
Этопозид100мг/м² в/в 1-3-й день.
Повторение цикла каждые 4 недели;
3) Дакарбазин – 200 мг/м² в/в в 1-3-й день
Эпирубицин – 25 мг/м² в/в в 1-3-й день
Фторурацил – 250 мг/ м² в/в в 1-3-й день
Повторение цикла каждые 3 недели;
4) Темозоломид — 150 мг/ м² /сут внутрь 7 дней, перерыв 7 дней
Бевацизумаб – 5 мг/кг в/в 1 раз в 2 недели
Продолжительность курса 22 недели;
5) Темозоломид — 150 мг/ м² /сут внутрь в 1 — 5-й день
Капецитабин – 2 г/ м² /сут внутрь в 1 – 14-й день
Бевацизумаб – 5 мг/кг в/в 1 раз в 2 недели
Повторение цикла каждые 28 дней;
6) XELOX: оксалиплатин 130 мг/м2 в 1й день, капецитабин 2000 мг/м2 в сутки (разделить в 2 приема, утором и вечером) в 1-14й дни;
7) α – интерферон 3-5 млн. ЕД п/к 3 раза в неделю. Доза подбирается индивидуально по переносимости.
Особый раздел неэпителиальных опухолей представляют GIST- недавно выделенная самостоятельная нозологическая единица, имеющая индивидуальные гистологические, иммуногистохимические и молекулярно-генетические признаки. Подавляющее большинство GIST (>90%) являются злокачественными. Подтверждением диагноза стромальных опухолей служит выявление в опухолевых клетках экспрессии рецептора Kit (CD117) иммуногистохимическим методом. В случаях первично операбельных GIST показано радикальное удаление опухоли. Использование иматиниба с адъювантной целью 400мг/сут внутрь в течение 1 года или до прогрессирования
При резистентности к иматинибу целесообразно увеличение дозы препарата до 800мг/сут. Получены обнадеживающие результаты использования после прогрессирования на фоне лечения иматинибом во второй линии терапии сунитиниба (в монорежиме или в комбинации с иматинибом).
Сунитиниб применяют в дозе 50мг/сут перорально ежедневно в течение 4 нед, затем следует 2-недельный перерыв с возобновлением терапии.
Другие виды лечения: нет.
Хирургическое вмешательство:
Хирургическое вмешательство, оказываемое в амбулаторных условиях: нет.
Хирургическое вмешательство, оказываемое в стационарных условиях:
Виды хирургических вмешательств:
· комбинированная расширенная гастрэктомия с лимфодиссекцией D-2;
· проксимальная субтотальная гастрэктомия;
· дистальная субтотальная гастрэктомия;
· лапароскопическая гастрэктомия.
Показания к хирургическому лечению:
· гистологически верифицированные операбельные ЗНО желудка;
· при отсутствии противопоказании к хирургическому лечению.
Противопоказания к хирургическому лечению при ЗНО желудка:
· наличие у больного признаков неоперабельности и тяжелой сопутствующей патологии;
· при отделенных метастазах (в печень, легкие, головной мозг и т.д.);
· при отделенных метастазах в лимфатические узлы шеи;
· при наличии опухолевых клеток в асцитической жидкости;
· обширные гематогенные метастазирования, диссеминированного опухолевого процесса;
· хронические декомпенсированные и/или острые функциональные нарушения дыхательной, сердечно-сосудистой, мочевыделительной системы;
· аллергия на препараты, используемые при общей анестезии.
Паллиативная помощь:
· При выраженном болевом синдроме лечение осуществляется в соответствии с рекомендациями протокола «Паллиативная помощь больным с хроническими прогрессирующими заболеваниями в инкурабельной стадии, сопровождающимися хроническим болевым синдромом», утвержден протоколом заседания Экспертной комиссии по вопросам развития здравоохранения МЗ РК №23 от «12» декабря 2013 года.
· При наличии кровотечения лечение осуществляется в соответствии с рекомендациями протокола «Паллиативная помощь больным с хроническими прогрессирующими заболеваниями в инкурабельной стадии, сопровождающимися кровотечением», утвержден протоколом заседания Экспертной комиссии по вопросам развития здравоохранения МЗ РК №23 от «12» декабря 2013 года.
Дальнейшее ведение:
Диспансерное наблюдение:
· первый год – 1 раз в 3 мес.;
· второй год – 1 раз в 6 мес.;
· в последующем, пожизненно — 1 раз в год.
Методы обследования:
· фиброгастроскопия;
· рентгенконтрастное исследование пищевода, анастомоза;
· УЗИ органов брюшной полости;
· Рентгенологическое исследование легких;
· УЗИ периферических лимфатических узлов;
· пальцевое исследование прямой кишки;
· осмотр гинеколога (у женщин);
· общий анализ крови.
По показаниям:
· Фиброколоноскопия;
· Ирригоскопия;
· КТ органов брюшной полостей и грудной клетки
· Ангиография сосудов брюшной полости
· МРТ органов брюшной полостей и грудной клетки;
· Сцинтиграфия костей скелета;
· Позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) + компьютерная томография
всего тела
Индикаторы эффективности лечения:
· «ответ опухоли» — регрессия опухоли после проведенного лечения;
· без рецидивная выживаемость (трех и пятилетняя);
· «качество жизни» включает кроме психологического, эмоционального и социального функционирования человека, физическое состояние организма больного

Препараты (действующие вещества), применяющиеся при лечении

Бевацизумаб (Bevacizumab)

Дакарбазин (Dacarbazine)

Доцетаксел (Docetaxel)

Иматиниб (Imatinib)

Интерферон альфа (Interferon alfa)

Иринотекан (Irinotecan)

Кальция фолинат (Calcium folinate)

Капецитабин (Capecitabine)

Карбоплатин (Carboplatin)

Натрия фолинат (Sodium folinate)

Оксалиплатин (Oxaliplatin)

Октреотид (Octreotide)

Сунитиниб (Sunitinib)

Темозоломид (Temozolomide)

Трастузумаб (Trastuzumab)

Фторурацил (Fluorouracil)

Цисплатин (Cisplatin)

Эверолимус (Everolimus)

Эпирубицин (Epirubicin)

Этопозид (Etoposide)

Группы препаратов согласно АТХ, применяющиеся при лечении

(H01CB) Гормоны, замедляющие рост

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной онкологии, и касается способа дифференцировки аденокарциномы G3 и перстневидноклеточного рака с помощью сравнительного определения копийности локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 в опухолевой и условно здоровой ткани желудка.

Своевременность выявления рака желудка, занимающего пятое место в мире по распространенности среди онкологических заболеваний, играет существенную роль в формировании прогноза течения заболевания. Рак желудка, являясь гетерогенным заболеванием, классифицируется в зависимости от гистологических, анатомических, эпидемиологических и молекулярных особенностей. Разные молекулярные первопричины малигнизации и биология опухоли подразумевают разные молекулярные мишени и прогностические биомаркеры для каждого подтипа рака желудка. Тем не менее в литературе недостаточно данных о корреляции между клинико-морфологическими классификациями и молекулярно-генетическими изменениями, характерными для каждого подтипа.

Изменение числа копий гена является одним из основных механизмов контроля раковой клеткой генов, ключевых для выживания и малигнизации, так как результатом этого генетического полиморфизма может стать снижение или повышение экспрессии продукта гена — белка или не кодирующей РНК. Таким образом, изменение копийности генов может представлять инициаторную точку генетических изменений при малигнизации тканей и прогрессии злокачественных новообразований.

Ген GSTP1 кодирует глутатион-S-трансферазу пи, один из ферментов второй фазы системы детоксикации гидрофобных и электрофильных ксенобиотиков и канцерогенов, который осуществляет их превращение из активных метаболитов в нетоксичные водорастворимые компоненты и предотвращает, таким образом, повреждение ДНК. Клиническая роль этого фермента при раке до сих пор неясна, в литературе имеются данные о снижении его экспрессии при плоскоклеточном раке полости рта и данные об увеличении количества копий этого гена в клеточных линиях рака головы и шеи (см. Ma et al. Decreased expression of glutathione S-transferase pi correlates with poorly differentiated grade in patients with oral squamous cell carcinoma// J of Oral Pathology&Medicine. 2015. V. 44, p. 193-200). Кроме того, показано, что потеря экспрессии GSTP1 преимущественно отмечается в случае Эпштейн-Барр-ассоциированного рака желудка, причем эффект глушения осуществляется путем метилирования промотора гена GSTP1 (Kim J. et al. Silencing and CpG Island Methylation of GSTP1 is Rare in Ordinary Gastric Carcinomas but Common in Epstein-Barr Virus-associated Gastric Carcinomas // Anticancer Research 2005. V. 25. N. 6B. P. 4013-4019.

NFKB1 кодирует транскрипционный фактор NF-κBI (ядерный фактор «каппа-би») — универсальный фактор транскрипции, контролирующий экспрессию генов иммунного ответа, апоптоза и клеточного цикла. В норме активность сигнального пути NF-κВ в клетке находится под строгим контролем, однако мутации различных генов могут стать причиной его конститутивной активации. Это имеет место при лимфомах и аденокарциномах различного происхождения, а также множественной миеломе (см. Staudt L.M. Oncogenic activation of NF-kappaB // Cold Sprin Harb Perspect Biol. 2010. B.6. N.2. C.a0001098. DOL10.1101/cshperspect.a000109 — PMID 20516126).

HV2 — локус D-петли митохондриальной ДНК (мтДНК) относится к регуляторным не кодирующим элементам и обладает высокой мутабельностью. Уровень мтДНК в лейкоцитах крови определяли во многих исследованиях различных видов рака, хотя вопрос о ценности показателя копийности мтДНК в лейкоцитах для диагностики и прогноза лечения опухолей желудка остается дискуссионным. Так, в широкомасштабном исследовании, включавшем группы пациентов с раком желудка на различных стадиях и условно здоровых доноров, не было обнаружено значимой ассоциации между числом копий мтДНК в лейкоцитах и риском развития рака желудка, но тем не менее была показана достоверная корреляция данного показателя и прогрессии заболевания (Liao L.M. et al. Mitochondrial DNA Copy Number and Risk of Gastric Cancer: a Report from the Shanghai Women’s Health Study // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2011, 20(9); 1944-9). Результаты другого исследования продемонстрировали достоверную ассоциацию копийности мтДНК с риском малигнизации тканей желудка (Fernfndes J. et al. Circulating Mitochondrial DNA Level, a Noninvasive Biomarker for the Early Detection of Gastric Cancer // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2014. 23(11); 2430-8).

Изобретение «Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов» является новым, так как не известна корреляция копийности генов GSTP1, NFKB1 и митохондриального локуса HV2 с классификацией опухоли при диагностике рака желудка.

Целью заявляемого изобретения является создание нового, простого в исполнении, недорогостоящего способа предварительной идентификации типов и стадии рака желудка.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что осуществляют амплификацию фрагментов локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет коэффициентов копийности генов по формуле K=rCcancer/rCnormal, где

K — коэффициент относительной копийности,

rCcancer — относительная копийность гена в опухолевой ткани,

rCnormal — относительная копийность гена в условно нормальной ткани, сравнивают полученные значения со стандартными коэффициентами копийности, при значении KGSTP1=0,85±0,11, KNFKB1=0,82±0,09 и KHV2=0,53±0,06 диагностируют аденокарциному G3, при значении KGSTP=1,21±0,02, KNFKB1=0,96±0,04 и KHV2=0,34±0,10 диагностируют перстневидноклеточный рак желудка.

Заявленный анализ основан на определении показателей относительной копийности генов (rC), нормализованных относительно референтного локуса гена В2М (β-2 микроглобин), и последующем вычислении коэффициента копийности генов (К) в опухолевой ткани по отношению к копийности генов в нормальной ткани.

Заявленный способ включает следующие приемы:

— выделение тотальной ДНК из тканевых проб с помощью метода фенол-хлороформной экстракции;

— определение относительной копийности генетических локусов методом ПЦР-РВ в присутствии красителя EVA-Green и специфичных праймеров на матрице выделенной ДНК;

— анализ первичных данных с помощью программного продукта амплификатора;

— расчет относительной копийности гена (rC) на основании соотношения сигналов, продуцируемых амплификатами изучаемой и референсной последовательностей,

— статистическая обработка данных и расчет коэффициентов копийности (Kобразец) с последующим сравнением со значениями коэффициентов копийности (Kстандарт), определенных для разных стадий и типов рака желудка.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

На первом этапе отбираются образцы тканей — опухолевые и условно здоровые, из операционного или биопсийного материала. Для транспортировки в лабораторию и хранения образцы замораживаются в жидком азоте.

Фрагменты ткани измельчаются скальпелем и/или ножницами, затем растираются в фарфоровых ступках в присутствии лизирующего SDS-содержащего буфера. К лизатам добавляется протеиназа К и инкубируется при t=56°C в течение 1 часа.

ДНК выделяется из прозрачного лизата тканей с использованием фенол-хлороформной экстракции (см. Корниенко И.В., Водолажский Д.И., Вейко В.П. и др. Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел. — Ростов-н/Д : ООО Ростиздат, 2001).

Концентрация полученных препаратов ДНК измеряется на флюориметре. Для проведения ПЦР-РВ концентрацию ДНК в каждом образце нормализовывают до 2нг/мкл.

Анализируемые последовательности генетических локусов амплифицируют в 25 мкл ПЦР-смеси, содержащей 10 нг геномной ДНК, 0,2 мМ dNTPs, 2,5 мМ MgCl2, 1x-ый ПЦР-буфер, 0,1 е.а. ДНК-полимеразы Thermus aquaticus («Синтол», Россия), краситель SYBR@Green I (Invitrogen, США) и по 100 нМ прямого и обратного праймеров для референтного гена (β-2 микроглобин) или гена-мишени. Прямые и обратные праймеры были разработаны для нуклеотидных последовательностей, содержащих интронные и экзонные участки генетических локусов, с использованием данных NCBI GenBank (таблица 1).

Для оптимизации ПЦР использовали только праймеры, которые обеспечивали специфичную амплификацию необходимого количества продукта и не образовывали между собой высокоэнергетических внутренних структур: шпилек и дуплексов. Оптимизировали такие параметры ПЦР, как концентрация MgCl2 и праймеров в ПЦР-смеси, соотношение прямых и обратных праймеров, количество циклов амплификации, время элонгации, денатурации и отжига праймеров. В результате оптимизации подобрали одинаковую температуру отжига праймеров для всех локусов.

В таблице 1 представлены выбранные последовательности прямого и обратного праймеров для ПЦР-РВ.

Количественную ПЦР-РВ амплификацию проводят на термоциклере, например, Bio-Rad CFX96 (USA), в соответствии с инструкциями производителя по следующей программе. Первичная денатурация: t=95°C в течение 3 мин. 40 циклов: t=95°C в течение 10 с, t=58°C в течение 30с, t=72°C в течение 15с. В одной постановке в качестве матрицы используют одновременно ДНК опытной (опухоль) и контрольной (условно здоровая ткань) пробы для определения сигналов, продуцируемых амплификатами локусов GSTP1, NFKB1, HV2 и референсного В2М; каждый вариант в трех повторностях.

Относительную копийность генетических локусов определяют, последовательно рассчитывая среднее значение сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам и уровень копийности исследуемого локуса относительно референсного гена В2М, по формуле rC=2-ΔCt, где rC — относительная копийность гена, ΔCt — разность среднего Ct гена мишени и среднего Ct референтного гена: ΔCt=Ct(ген мишень) — Ct(B2M).

Расчет коэффициентов копийности проводят по формуле K=rCcancer/rCnormal (где K — коэффициент относительной копийности, rCcancer — относительная копийность в опухолевой ткани, rCnormal — относительная копийность в условно нормальной ткани). Характеристика копийности генов GSTP1, NFKB1 и митохондриального локуса HV2 для разных гистологических типов рака желудка представлена в таблице 2.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример №1.

Больной Д., 1951 г.р., обратился в ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ с жалобами на периодические боли в эпигастрии, подреберьях, тошноту, периодическую рвоту, слабость, похудание на 15 кг, отечность нижних конечностей, одышку при нагрузке. Считает себя больным более года, ухудшение с весны 2013, когда в течение месяца был черный стул, повторно черный стул был в сентябре 2013 в течение 10 дней. Трижды терял сознание, чему предшествовало жжение в эпигастрии, выраженная слабость. Находился на стационарном обследовании и лечении по месту жительства, при ФГС выявлена опухоль желудка.

При обследовании в поликлинике РНИОИ была выявлена инфильтративно-язвенная опухоль тела желудка (ФГС №30/68672 от 14.01.2014 г.). Гистоанализ 632-35/14: диагноз колеблется между аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. СРКТ от 14.01.2014 г. — многоузловая опухоль желудка 9,5×6,7×4,5 см с внутрипросветным ростом, парагастральные лимфоузлы до 1,5 см. МРТ головного мозга 15.01.2014: метастазов нет.15.01.2014 консультация невролога: ДЭП. Больному был поставлен предварительный диагноз: рак тела желудка, T3-4N1M0, стадия 3, гр. 2.

В связи с неуточненным гистогенезом опухоли, больному было выполнено определение уровня копийности локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 в биоптатах опухоли и условно здоровой ткани желудка. Результаты исследования (KGSTP1=0,74; KNFKB1=0,79 и KHV2=0,48) свидетельствовали о наличии у больного G3 аденокарциномы желудка.

В связи с высокой чувствительностью G3 аденокарциномы желудка к полихимиотерапии и местнораспространенным характером опухоли у пациента, консилиумом врачей решено начать специальное лечение с курсов полихимиотерапии. Проведено 3 курса полихимиотерапии по схеме: карбоплатин, фторурацил, лейковарин, с интервалом 21 день. При контрольном СРКТ-исследовании отмечалось уменьшение размеров опухоли желудка до 7,5×5,0×3,2 см, парагастральных лимфоузлов до 0,8 см.

15.04.2014 г. больному выполнена лапаротомия, при которой выявлено: опухоль тела желудка размером 7,5×5×3,5 см, плотная, регинарные лимфоузлы до 1 см, отдаленных метастазов нет. Выполнена гастрэктомия с расширенной лимфаденэктомией.

Препарат: желудок с опухолью, поражающей тело желудка, экзофитной, с папиллярными разрастаниями, на разрезе грязно-серого цвета, большой и малый сальники, регионарные лимфоузлы до 1 см; дистальная линия резекции в 5 см от опухоли, проксимальная линия резекции в 6 см от опухоли.

Послеоперационный гистоанализ 4541-54/14 подтвердил наличие у больного низкодифференцированной аденокарциномы желудка: G3 аденокарцинома желудка, инвазия всей толщи стенки желудка, в 3 лимфоузлах — метастазы рака, по линиям резекции опухоли нет.

Послеоперационный диагноз: рак тела желудка, T3N1M0, стадия 3, гр.2. Больному было проведено еще 3 курса полихимиотерапии по прежней схеме. Динамическое наблюдение за больным (ФЭС, СРКТ, УЗИ) свидетельствует об отсутствии у больного рецидива и метастазов опухоли.

Анализ представленного клинического случая свидетельствует о важности установления гистогенеза опухоли желудка для определения правильной тактики лечения.

Пример №2.

Больная Ш., 1956 г. р. обратилась в ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ с жалобами на боли в эпигастрии, отрыжку, слабость, небольшое похудание.

Считает себя больной с ноября 2013 г, когда впервые стала отмечать периодические боли в эпигастрии. Обратилась в декабре 2013 г. по месту жительства, где на ФГС выявлена опухоль желудка. На СРКТ в РНИОИ — утолщение стенки желудка, отдаленных метастазов нет, лимфоузлы перигастральные до 1,0 см. Гистологический анализ №82128-30: диагноз колеблется между аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. Консультация гинеколога: онкогинекологической патологии не выявлено. Больной был установлен диагноз: рак тела желудка, T3N1M0, стадия 3, гр.2.

В связи с неуточненным гистогенезом опухоли, больной было выполнено определение уровня копийности генов GSTP1, NFKB1 и HV2 в биоптатах опухоли и условно здоровой ткани желудка. Результаты исследования (KGSTP1=1,22; KNFKB1=0,98 и KHV2=0,29) свидетельствовали о наличии у больной перстневидноклеточного рака желудка.

В связи с низкой чувствительностью перстневидноклеточного рака желудка к полихимиотерапии, несмотря на местнораспространенный характер опухоли у пациентки, консилиумом врачей решено начать специальное лечение с оперативного вмешательства.

20.01.2014 больной выполнена лапаротомия, при которой выявлено: инфильтративная опухоль кардиального отдела желудка по малой кривизне и задней стенке размерами до 6×5×3 см, не прорастающая серозную оболочку, регионарные лимфоузлы до 0,8 см, отдаленных метастазов нет. Больной выполнена гастрэктомия с расширенной лимфодиссекцией D2.

Препарат: 1) единым блоком — желудок с инфильтративной опухолью кардиального отдела желудка, размерами 6×5×3 см, не прорастает серозную оболочку, плотной консистенции, на разрезе грязно-серого цвета, большой и малый сальники; 2) 12 лимфоузлов сальников и области чревного ствола до 0,5-1.0 см в диаметре.

Гистологический анализ 3074-98/14-перстневидноклеточный и слизистый рак с инвазией всех слоев, по линиям резекции опухоли нет, в 13 регионарных лимфоузлах метастазов рака нет. Послеоперационный гистоанализ подтвердил наличие у больной перстневидноклеточного рака желудка и правильность тактики лечения больной.

Больная консультирована химиотерапевтом: учитывая гистологию рака желудка, больной адъювантная химиотерапия не показана.

Послеоперационный диагноз: рак тела желудка, T3N0M0, стадия 2, гр.3. Динамическое наблюдение за больной (ФЭС, СРКТ, УЗИ) свидетельствует об отсутствии у больной рецидива и метастазов опухоли.

Анализ представленного клинического случая также свидетельствует о важности установления гистогенеза опухоли желудка для определения правильной тактики лечения, которая отличается при разных гистологических формах рака желудка.

Технико-экономическая эффективность изобретения «Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов» позволяет дифференцировать аденокарциному и перстневидноклеточный рак желудка. Заявляемый способ является экономически оправданным для уточнения предоперационного диагноза, дает возможность своевременной дифференцировки вида опухоли желудка; принятия правильной тактики лечения больных и улучшению результатов лечения больных раком желудка; осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии (ПЦР), без использования специального дорогостоящего оборудования; отбор материала для его осуществления возможно совместить с гастроскопической биопсией, способ занимает менее 10 часов.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *